Камери рахункові
КАМЕРИ рахункові - прилади для підрахунку формених елементів крові, сечі і цереброспінальної рідини, а також мікроорганізмів. Запропоновано К. с. франц. фізіологом Малассі (L. Ch. Malassez) в 1874 р
Відео: Практичні навички з фізіології: Підрахунок числа еритроцитів
К. с. являють собою товсте предметне скло з поглибленням, на дні догрого викарбувано лічильна сітка над поглибленням накладають шліфоване покривне скло. Постійна висота К. с. забезпечується щільним притиранням покривного і предметного скла до освіти райдужних ньютонова кілець (смуги інтерференції).
Структурними елементами всіх типів сіток є великі і малі квадрати. Сітки різних типів - Тома, Бюркера, Предтеченского, Тюрка, Нейбауер, Горяєва, Фукса - Розенталя и др відрізняються різним групуванням великих і малих квадратів.
Відомі величини - висота камери, площа сітки і її поділів і розведення взятої для дослідження крові - дозволяють вирахувати кількість формених елементів в певному обсязі (1 мкл) крові (або іншого середовища).
Розрізняють відкриті і закриті К. с. У закритій камері покривне скло притирають після її заповнення, і при цьому в неї можуть потрапити бульбашки повітря. Такі К. с. (Тома - Цейсса з сіткою Тома, Дунгер з особливою сіткою) незручні в роботі і не використовуються.
Мал. 1. Схема відкритої лічильної камери для підрахунку кров`яних клітин (а - загальний вигляд-б - вид збоку): 1 - пластинки з вигравіруваними сеткамі- 2 - поздовжні желобкі- середня частина платівки нижче бічних на 0,1 мм (глибина камери) і розділена поперечним желобком (3) - 4 - покривне скло.
Відкриті камери (рис. 1) заповнюються після притирання покривного скла. Вони мають дві сітки на одному предметному склі. Платівки з вигравіруваними сітками відмежовані желобками одна від одної, а також від іншої частини предметного скла. Наявність жолобків дає можливість регулювати заповнення камер. Деякі камери забезпечені металевими зажимами, що фіксують покривне скло.
Мал. 2. Схема сітки Горяєва: 1 - великі порожні квадрати (всього 100) - 2 - великі квадрати, розділені на малі (по 16) - 3 - великі квадрати, розділені смугами.
Відкриті К. с. вперше описав С. П. Алфьоров в 1883 р потім в 1905 р Бюркера (К. Burker). Відомі відкриті рахункові камери Ключарева, Гауссер і Леві, Гельбера, Глауберманна. В СРСР широко застосовуються рахункові камери Горяєва і Фукса - Розенталя. Камера Горяєва з сіткою Горяєва (рис. 2) має обсяг 0,9 мкл, площа сітки 9 мм 2. Сітка складається з 225 великих квадратов- з них 100 - порожні, 25 - розділені кожен на 16 малих квадратів, 100 - розділені смугами.
Мал. 3. Схема сітки Фукса - Розенталя.
Рахункова камера Фукса - Розенталя з сіткою Фукса - Розенталя (рис. 3) має обсяг 3,2 мкл, площа сітки 16 мм 2. вона складається з 256 великих квадратів (квадрати, розділені смугами, не вважають).
Методика роботи
Перед роботою предметне скло К. с. і шліфоване покривне скло миють під струменем водопровідної води і насухо витирають. Потім щільно притирають покривне скло до камери (до появи райдужних ньютонова кілець, бо тільки за цієї умови обсяг К. с. Постійний).
Мал. 4. Схема квадрата сітки з підлеглими (чорні кружечки) і не підлягають рахунку (білі кружечки) клітинами.
Відео: Відео доповідь на тему "Історія розвитку рахункових пристроїв"
Вміст пробірки перед заповненням камери кілька разів перемішують, потім оплавленим кінцем скляної палички відбирають з пробірки, нахиляючи її, краплю крові і наносять на предметне скло у самого краю покривного скла. Якщо однієї краплі крові недостатньо для повного заповнення К. с. додають ще краплю. Якщо кров взята в змішувач, то перші краплі з капіляра змішувача випускають, а К. с. заповнюють краплею з ампули змішувача. Залишки рідини з предметного скла видаляють марлевим тампоном. Підрахунок починають через 3 хв. після заповнення камери (за цей час відбувається осідання формених елементів крові) під мікроскопом при малому збільшенні (об`єктив X 8, окуляр X 10 або X 15) і затемненому полі зору (з прикритою діафрагмою або при кілька опущеному конденсорі). Рахунком підлягають клітини, що лежать всередині квадрата (рис. 4). Клітини, пересічені сторонами квадратів, вважають в такий спосіб: якщо більше половини клітини знаходиться всередині квадрата, то її вважають, якщо поза - її не вважають. Клітини, що перетинаються лініями точно посередині, вважають на двох суміжних, правої і верхньої, лініях квадратів і не вважають на двох інших. При використанні відповідних розвідних розчинів еритроцити, лейкоцити, тромбоцити, еозинофіли, базофіли і ретикулоцити можуть бути підраховані в камері Горяєва.
Еритроцити вважають в 80 малих квадратах, т. Е. В 5 великих квадратах, розташованих по діагоналі. Розрахунок проводиться за формулою:
де а - кількість еритроцитів, підрахована в 80 малих квадратах, 80 - кількість полічених малих квадратів, 200 - ступінь розведення крові, 4000 - множник для отримання вмісту еритроцитів в 1 мкл крові (обсяг малого квадрата 1/4000 мкл). Практично кількість еритроцитів, підрахована в 5 великих квадратах, множать на 10 000.
Лейкоцити підраховують в 1600 малих квадратах (в 100 великих квадратах). Розрахунок проводиться за формулою:
X = a * 4000 * 20/1600,
де а - кількість лейкоцитів, підрахована в 1600 малих квадратах, 1600 - кількість полічених малих квадратів, 20 - ступінь розведення крові, 4000 - множник для отримання вмісту лейкоцитів в 1 мкл крові. Практично кількість лейкоцитів, підрахована в 1600 малих квадратах, множать на 50.
Тромбоцити підраховують в 400 малих квадратах (25 великих квадратах по діагоналі сітки). Реактивами для розведення можуть бути ізотонічний розчин хлориду натрію, різні розчини, консервуючі тромбоцити і гемолізуючих еритроцити.
Вважають тромбоцити під звичайним мікроскопом і за допомогою фазово-контрастного пристрою (див. Фазово-контрастна мікроскопія) для більш чіткого виявлення їх. Після розведення пробірку з кров`ю залишають на 25-30 хв. для гемолізу еритроцитів. Потім вміст пробірки повторно перемішують і заповнюють К. с. доурую поміщають на 5 хв. у вологу камеру (напр. чашки Петрі з вологою ватою) для осідання тромбоцитів. Розрахунок проводять за формулою:
де а - кількість тромбоцитів. підрахована в 400 малих квадратах, 200 - ступінь розведення крові, 400 - число полічених малих квадратів, 4000 - множник для отримання вмісту тромбоцитів в 1 мкл крові. Практично кількість тромбоцитів, підрахована в 400 малих квадратах, множать на 2000.
Кількість базофілів і еозинофілів підраховують в камері Горяєва в 1600 малих квадратах, як і лейкоцити. Практично підрахована кількість базофілів і еозинофілів множать на 50.
Ретикулоцити підраховують в камері Горяєва в 80 малих квадратах, як еритроцити. Практично підрахована кількість ретикулоцитів множать на 10 000.
Визначення загальної кількості клітин в цереброспінальній рідині (див.) Краще проводити в камері Фукса - Розенталя (через невеликого числа лейкоцитів в цереброспінальній рідині). Підраховують по всій сітці (256 великих квадратів) під малим збільшенням мікроскопа (окуляр X 15, об`єктив х 8).
При дуже великій кількості клітин допускається підрахунок половини сітки (з наступним множенням результату на 2). Розрахунок проводять за формулою:
де а - кількість клітин, підрахована в 256 квадратах, 11 / 10- ступінь розведення, 3,2 обсяг камери в мкл. Практично при підрахунку в камері Фукса - Розенталя число лейкоцитів ділять на 3.
У камері Горяєва клітини цереброспинальной рідини вважають не менше 3 разів (також всю площу), кожен раз заповнюючи камеру заново, потім беруть середнє арифметичне. Розрахунок проводять за формулою:
де а - середнє арифметичне кількість клітин, підрахована по всій сітці, 11/10 - ступінь розведення, 0,9 - обсяг камери в мкл. Практично число підрахованих лейкоцитів множать на 1,2.
Кількісне визначення формених елементів в сечі проводить в камерах Фукса - Розенталя, Горяєва: підрахунок еритроцитів і лейкоцитів при середньому збільшенні мікроскопа, підрахунок циліндрів - при малому. Ступінь розведення сечі залежить від методу дослідження (див. Сеча).
Підрахунок в К. с. не цілком точний. Помилка методу складає від 10 до 20% в залежності від кількості підраховуваних елементів.
Догляд та умови зберігання
Слід оберігати камери від забруднення та попадання пилу на сітку. Після роботи камеру і покривне скло миють під струменем водопровідної води і обережно, але ретельно витирають чистою серветкою (можна марлевою). Потім загортають в папір і прибирають в коробку.
Бібліографія: Довідник з клінічних лабораторних методів дослідження, під ред. Е. А. Кост, с. 22, М. 1975.
Д. Н. Ишмухаметов
