Диференційно-діагностичні середовища

Диференційно-діагностичні середовища - спеціальні суміші поживних речовин, що застосовуються для визначення видової приналежності мікробів і вивчення їх властивостей. При зростанні бактерій на диференційно-діагностичних середовищах протікають хімічні процеси, обумовлені наявністю у мікробної клітини різних ферментів. Одні з них здатні розщеплювати білки, інші -углеводи, треті - викликати реакції окислення і відновлення і т. Д. Завдяки дії ферментів в диференційно-діагностичної середовищі відбуваються відповідні зміни.

Диференційно-діагностичні середовища можна розділити на чотири основні групи.

1. Середовища, що містять білок і виявляють здатність мікробів розщеплювати білки (протеолітичні Властивості): м`ясо-пептонна желатину «стовпчиком», згорнута кінська або бичача сироватка, молоко, кров`яний агар. При посіві бактерій проколом в м`ясо-пептони желатину, «стовпчиком» в разі розщеплення білка спостерігають розрідження середовища. При посіві на середовище зі згорнутою сироваткою розщеплення білка визначають за розрідженню середовища і утворення поглиблень на її поверхні. Розщеплення мікробом молока виявляється просвітленням або розчиненням спочатку кисле молоко. Наявність гемолітичної активності досліджуваної культури перевіряють посівом її в чашку Петрі на спеціальний кров`яний агар. В результаті руйнування еритроцитів навколо колоній (наприклад, гемолітичного стрептококу або стафілокока) утворюються зони просвітління.

2. Середовища для виявлення здатності мікробів розщеплювати вуглеводи і високоатомние спирти (Ендо середовище, Левіна середовище, Расселла середовище, Дрігальского - Конраді середовище, Рапопорт - Вайнтрауба середовище, Шустова середовище). Для виявлення цих властивостей мікроорганізмів застосовують також «строкатий» ряд, т. Е. Серію пробірок, що містять поживні середовища, що включають різні вуглеводи, багатоатомні спирти і індикатор. В якості індикаторів користуються лакмусовим настоянкою або бромтимоловим синім. Розкладання будь-якого з вуглеводів з утворенням кислоти виявляють за зміною кольору індикатора, освіту газу- щодо заповнення газом і спливання спеціального скляного поплавка в рідкому середовищі. Або застосовують напіврідкі Гисса середовища (див.) З 0,5% агару з відповідними цукрами і індикатором Андраде. Після посіву мікроба на ці середовища утворення кислоти виявляють почервонінням середовища, а освіту газу - по появі його бульбашок в агарі або по розриву і зрушенню вгору агарного стовпчика. До диференційно-діагностичним середах другої групи відносять також крохмальний агар, службовець для визначення здатності мікробів розщеплювати крохмаль, середу Кларка і ін.

3. Середовища, на яких виявляється здатність мікробів знебарвлювати барвники, додані до бульйону: метиленовий синій, метіонін, лакмус, індигокармін, нейтральний червоний або інші (середа Ротбергера, середа Омелянського). До третьої групи відносять також середовища з нітратами, службовці для визначення здатності мікробів відновлювати солі азотної кислоти (нітрати) в солі азотної кислоти (нітрити) і далі в аміак або вільний азот.

4. Середовища, що виявляють здатність мікробів засвоювати речовини, які не засвоюються іншими мікробами, наприклад середовище з лімоннокіслим натрієм (цитратний агар Сімонса) для відмінності кишкової палички, яка позбавлена можливості асимілювати цю середу, від інших бактерій кишкової групи або середовище з олеіновокіслим натрієм для диференціації дифтерійної палички від помилково дифтерійній і дифтероїдів (агар Енжерінга).
До диференційно-діагностичним середах відносять також середовища для диференціації анаеробів, телуритовий середовища для диференціації дифтерійних бактерій, середовища з сечовиною, лужні середовища (Додання агар) для культивування холерного вібріона та ін.

Мал. 1-6. Різні форми розщеплення желатин.

Мал. 7 - 9. Рідке середовище з вуглеводом і індикатором Андраде: рис. 7 - відсутність ферментаціі- рис. 8 - ферментація з утворенням кислоти-рис. 9 - ферментація з утворенням кислоти і газу.

Мал. 10 - 12. Напіврідка середа з вуглеводом і індикатором BP (з сухою живильного середовища): рис. 10 - відсутність ферментаціі- рис. 11 - ферментація з утворенням кислоти-рис. 12 - ферментація з утворенням кислоти і газу.

Мал. 13-15. Штучна лакмусовий сироватка по Зейтца: рис. 13 - відсутність ферментаціі- рис. 14 - ферментація з утворенням кислоти-рис. 15 - ферментація з утворенням лугу.

Мал. 16 і 17. Молоко з метиленовим синім: рис. 16 - відсутність редукціі- рис. 17 -редукція.

Мал. 18 і 19. середу Сімонса: рис. 18 -відсутність асиміляції цітрата- рис. 19 - асиміляція цитрату.

Мал. 20 - 24. лакмусовим молоко: рис. 20 - відсутність ферментаціі- рис. 21 - ферментація з утворенням кислоти-рис. 22 - ферментація з утворенням щелочі- рис. 23 - пептонізація- рис. 24 - редукція.