Дослідження сечі на білок
Ветеринарна медицина
Дослідження сечі на білок
Дослідження сечі на білок має важливе значення в діагностичному відношенні. Білкові речовини в сечі показують на патологічний процес.
Невелика кількість білка може бути виявлено складними методами і у здорових тварин. Ці нікчемні сліди білка не беруться до уваги і сечу здорових тварин клінічно прийнято вважати вільної від білка.
При патологічних станах нирковий фільтр втрачає здатність затримувати білки крові і вони починають надходити у великій кількості в сечу. Залежно від чинників, які зумовлюють появу білка в сечі, розрізняють альбуминурию-фізіологічну і патологічну.
До фізіологічних Альбумінурія прийнято відносити: алиментарную альбуминурию, альбуминурию новонароджених і альбуминурию породіль. Кількість білка при фізіологічних Альбумінурія буває незначним, стан це є перехідним і, крім того, в сечі зазвичай не виявляється інших компонентів, які свідчать про поразку нирок, а також немає і відповідних клінічних проявів. При аналізі альбуминурии, крім кількісного визначення білка і мікроскопії осаду, необхідно ретельне дослідження тваринного і особливо самої нирки, а також і органів, функціонально з нею пов`язаних.
Патологічна альбумінурія спостерігається при багатьох захворюваннях і служить не критерієм хвороби, а одним з ознак захворювання, часто не визначальним суті страждання.
Справжня, або реальна, альбумінурія зустрічається при гострих запальних і дегенеративних захворюваннях нирок. Кількість білка, що надходить в сечу, залежить від ступеня ураження та поширеності. При дифузних ураженнях, що охоплюють рівномірно ниркову паренхіму, зазвичай відзначається велика кількість білка в сечі, в той час як одностороннє ураження або осередкове захворювання нирок протікає з незначною альбуминурией. При нефрозах кількість білка досягає високої сте;
Пені, в той час як хронічне захворювання нирок протікає з незначною альбуминурией, а в ряді випадків білок в сечі не відмічається зовсім.
Застійна гіперемія нирок, що виникає на грунті некомпенсованого пороку серця, супроводжується помірною альбуминурией.
З патологічних процесів, не пов`язаних безпосередньо з нирками, можна назвати захворювання крові паразитарного характеру, лейкемії, первинні і вторинні анемії, важкі захворювання кишечника, такі, як ентерит, мікози кишечника, паратуберкульоз великої рогатої худоби, важкі інфекційні і гарячкові захворювання, при яких має місце зниження кров`яного тиску і дегенерація ниркового епітелію.
Скупчення вуглекислоти в крові може при важких стражданнях легких служити причиною появи альбумінурії, яка є швидко-що проходить.
Крім істинної альбуминурии, необхідно враховувати альбуминурию неправдиву або випадкову, яка є наслідком домішки білка в нижніх сечових шляхах-сечовому міхурі або уретрі.
Для дослідження сечі на білок необхідно, щоб вона була вільною від різних домішок (витікання з піхви, фекалій і т. Д.) І прозорою.
Просвітлення сечі досягається різними способами-відстоюванням, фільтруванням і центрифугуванням. Найбільш швидко просвітлення сечі досягається центрифугуванням, після чого сеча стає зазвичай абсолютно прозорою і тільки в окремих випадках злегка опалесцирует. При незначному помутнінні сечі досить буває відстоювання протягом однієї години.
Сильно каламутну сечу можна просветлить фільтруванням через паперовий фільтр. При аммиачном бродінні каламутну сечу збовтують з твариною вугіллям, інфузорної землею або вуглекислим барієм. При малих Альбумінурія цей метод непридатний, тому що частина білка адсорбується. Шпет в цих випадках рекомендує для об`єктивної оцінки отриманих результатів порівнювати випробувану сечу з нативної, що не піддавалася обробці.
Для просвітлення каламутною і слизової сечі коні дуже зручний метод Кулакова. Сеча наливається в вузький скляний циліндр, закривається ватним корком, яка скляною паличкою або спеціальними щипцями продавлюється через шар сечі до дна циліндра. Над пробкою після цього про-давліванія з`являється абсолютно прозора сеча, придатна для хімічного дослідження на білок.
Якісне дослідження на білок. У ветеринарній практиці знайшли широке застосування наступні проби.
Проба кип`ятінням. В пробірку набирається 5-10 мл випробуваної сечі. Лужна сеча подкисляется декількома краплями 10% -ної азотної або оцтової кислоти до нейтральної або слабокислою реакції і на полум`ї пальника нагрівається до кипіння.
Помутніння рідини або випадання бавовняно осаду вказує на присутність білка. При негативному результаті можна додати до гарячої сечі рівний обсяг насиченого розчину кухонної солі. Моментально ^ помутніння всієї рідини свідчить про наявність в сечі білка. В комбінат ції з реакцією на висолювання проба з кип`ятінням є досить чутливою і досить простий.
Проба Геллера. У пробірку наливають прозору випробувану сечу. За допомогою піпетки під сечу подслаівается концентрована азотна кислота. Синьов рекомендує сечу нашаровувати на кислоту. У присутності білка на межі двох рідин виходить біле пухке кільце різної товщини в залежності від кількості білка, що знаходиться в сечі. При незначних Альбумінурія кільце виникає через 2-3 хвилини після подслаіванія або нашарування рідин. Проба з азотною кислотою дає позитивний результат при наявності в сечі 0,033% білка.
Проба концентрованою азотною кислотою дає позитивний результат не тільки з сироватковими білками, але і з альбумоз, бальзамними речовинами і нуклеоальбуминов. У присутності сечокислих солей і фарбувальних речовин в сечі на кордоні двох рідин виходять кольорові кільця. Осад з альбумоз зникає при нагріванні і знову з`являється при охолодженні випробуваної порції сечі, а нуклеоальбуминов розчиняється в надлишку азотної кислоти. Муть з бальзамних і смолистих речовин розчиняється після додавання подвійного обсягу спирту або великих кількостей ефіру.
Проба Бедекера. Сечу попередньо необхідно розбавити водою в рівних кількостях, щоб виключити можливість осадження сечокислих солей. Потім до 5 мл сечі додають по краплях 10% -ний розчин оцтової кислоти до абсолютно ясною кислої реакції. Якщо після цього з`являється муть, то сечу необхідно профільтрувати, щоб позбутися від нуклеоальбуминов, муцина або уратів. Потім в сечу додають 3-4 краплі 10% -ного розчину железосинеродистого калію (надлишок реактиву розчиняє білок). Залежно від кількості білка з`являється опалесценція, муть або бавовняно осад. Ця проба виявляє сироватковий білок і альбумоз. Остання розчиняється при кип`ятінні і знову з`являється після охолодження.
Ця проба може бути видозмінена в такий спосіб. Безпосередньо перед дослідженням змішують в рівних обсягах 10% -ний розчин оцтової кислоти і 10% -ний розчин железосинеродистого калію і на цю суміш нашаровується прозора розбавлена навпіл сеча. Позитивна реакція характеризується появою білого бавовняно осаду на кордоні двох рідин. Проба з залізосиньородистим калієм виявляє білок в кількості 0,002% (сеча не повинна містити цинку).
Проба Танрета. Реактив складається з 1,35 сулеми, 3,32 йодистого калію, 20,0 оцтової кислоти і 60,0 дистильованої води. Реактив додають до профільтрованої сечі по краплях. Позитивна реакція характеризується появою каламуті або білого бавовняно осаду. Пробій з сулемою виявляється сироватковий білок і альбумоз. Якщо при нагріванні сечі осад зникає, а після охолодження з`являється знову, то це говорить про наявність в сечі альбумоз. Проба з сулемою особливо придатна для виявлення в сечі альбумоз.
Проба Роча і Вільяма. Як реактиву використовується 20% -ний розчин сульфосалициловой кислоти (за нашими спостереженнями, цілком придатний для використання і 10% -ний розчин). У профільтровану сечу реактив додають по краплях. При наявності сироваткового білка виходить муть або випадає білий бавовняно осад. Ця проба має велику чутливість, даючи позитивну реакцію при розведенні білка в сечі 1. 50 000.
Рухлядев цю пробу особливо рекомендує для дослідження сечі коні. Ют реактиву розчиняються вуглекислі солі, що знаходяться у великій кількості в сечі коні, сеча прояснюється, позбавляючи тим самим від попереднього фільтрування або відстоювання в нагальних випадках.
Кількісне визначення білка.
Приблизне визначення кількості білка в сечі можливо при відомій навичці по інтенсивності одержуваної реакції. Більш точні результати виходять при проведенні кількісних проб. Аналітичний спосіб за вагою клопітливий для клінічної практики і вимагає великої обачності.
Найбільш простим і широко поширеним способом кількісного визначення білка є метод Есбаха і швидкісний метод Ауфрехт.
Метод Есбаха. Для визначення кількості білка за цим методом необхідно мати спеціальний альбумінометр, запропонований автором, який являє собою товстостінну, градуированную, з закруглений им або конічним дном пробірку на ніжці або в спеціальній підставці. Крім альбумінометра, необхідно мати також реактив Есбаха наступного складу: 1,0 пікринової кислоти, 2,0 лимонної кислоти і 100,0 дистильованої води.
Сеча високу питому вагу розбавляється навпіл дистильованою водою, сеча лужна подкисляется розчином виннокаменной кислоти.
Випробувана сеча наливається до мітки-І (мітка І-сеча) і потім до мітки Р наливається реактив. Альбумінометр потім закривається гумовою пробкою і обережно, щоб не вспінювати сечу, повертається кілька разів (2-3 хвилини). У присутності білка виходить або помутніння або зважений в рідини пухкий білий осад. Після цього альбумінометр залишають стояти при кімнатній температурі на 24 години, після чого кількість білка визначається за шкалою, нанесеною на стінці альбумінометра.
Кожне розподіл нижнього кінця альбумінометр а відповідає розведенню білка 1. 1 000. Якщо проба ставилася з сечею, розведеною водою, то показання альбумінометра слід помножити на ступінь розведення.
Слід врахувати, що при лікуванні хініном, антипірином і бальзамними речовинами може випадати осад і при відсутності в сечі білка.
Метод Ауфрехт є прискореним методом визначення кількості білка в сечі. Для постановки проби необхідно мати альбумінометр Ауфрехт, що представляє собою градуйовану центрифужную пробірку, центрифугу і реактив наступного складу: 1,5 пікринової кислоти, 3,0 лимонної кислоти і 100,0 дистильованої води.
У альбумінометр наливають 4 мл кіслореагірующей або підкисленою сечі і 3 мл реактиву. Пробірка закривається гумовою пробкою і повільно кілька разів перевертається. Центрифугування проводиться протягом 2-3 хвилин, після чого визначається кількість випав осаду. Розведення сечі водою при цьому методі не потрібно.
У практичному відношенні дуже зручною є наступна кількісна проба: у градуйовану центрифужную пробірку наливають 10 мл профільтрованої і підкисленою сечі і потім послідовно додають 1 мл оцтової кислоти, 1 мл води і 3 мл 10% -ного розчину жовтої кров`яної солі. Після 3-хвилинного центрифугування при 2 000 оборот визначається відсоток вмісту білка з розрахунку 0,5% білка на кожні 025 мл осаду.
З інших методів визначення кількості білка в сечі заслуговує на увагу метод Робертса-Стольнікова.
Метод Робертса - Стольників а. Метод кількісного визначення білка по Стольнікова заснований на спостереженні над граничною чутливістю проби з концентрованою азотною кислотою, по якій рівно через 3 хвилини після нашарування сечі на реактив з`являється біле кільце. Кількість білка, при якому з`являється позитивна реакція, дорівнює 0,033%. Завдання полягає в тому, щоб приготувати таке розведення сечі, яке дало б позитивну реакцію рівно через 3 хвилини після нашарування. У цьому розведенні кількість білка і дорівнюватиме 0,033%.
Техніка визначення. В один ряд пробірок набирають по 2 мл міцної азотної кислоти, а в іншій по 2 мл сечі, розведеною в 10 разів (1 мл сечі на 9 мл води). Потім робиться нове розведення сечі додаванням дистильованої сечі в кількостях, зазначених в таблиці. Після цього розбавлена сеча нашаровується на кислоту і по годинах враховується розведення, яке дає позитивну реакцію рівно через 3 хвилини. За що додається таблиці неважко знайти вміст білка в нерозбавленою сечі.
Кількість води, доданий до 2 мл сечі
